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MaxCyte電穿孔技術(shù):病毒載體生產(chǎn)的新革命

發(fā)布日期:2024-11-22      瀏覽次數(shù):154

01. 研究背景

(1) 研究問(wèn)題:這篇文章主要探討了使用MaxCyte流式電穿孔技術(shù)進(jìn)行病毒載體(包括腺相關(guān)病毒和慢病毒)生產(chǎn)的方法和效率。

(2) 研究難點(diǎn):傳統(tǒng)的病毒載體生產(chǎn)技術(shù)勞動(dòng)密集、步驟多且效率低,難以滿足大規(guī)模生產(chǎn)的需求。

(3) 相關(guān)工作:MaxCyte的流式電穿孔技術(shù)作為一種通用的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染平臺(tái),旨在解決病毒載體生產(chǎn)的諸多問(wèn)題。



02. 研究方法

提出了使用MaxCyte流式電穿孔技術(shù)進(jìn)行病毒載體生產(chǎn)的方法。具體來(lái)說(shuō)包括:

(1) 細(xì)胞類型:該技術(shù)適用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。

(2) 多質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染:MaxCyte系統(tǒng)可以同時(shí)轉(zhuǎn)染多個(gè)質(zhì)粒,包括大質(zhì)粒,從而制造復(fù)雜的病毒載體。

(3) 可擴(kuò)展性:MaxCyte系統(tǒng)在不同規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)中表現(xiàn)出一致的高轉(zhuǎn)染效率和細(xì)胞活力。



03. 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

(1) 大規(guī)模慢病毒生產(chǎn):在貼壁HEK細(xì)胞中使用MaxCyte STX進(jìn)行四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染。

•  HEK 293FT細(xì)胞在轉(zhuǎn)染前2-3天在10層細(xì)胞工廠中接種。

•  使用流式電穿孔技術(shù)進(jìn)行共轉(zhuǎn)染,每天收集培養(yǎng)基并測(cè)量轉(zhuǎn)導(dǎo)單位。


(2) 懸浮細(xì)胞中的慢病毒生產(chǎn):懸浮適應(yīng)的HEK 293FT細(xì)胞在10L Wave Cellbags中培養(yǎng),通過(guò)流式電穿孔技術(shù)轉(zhuǎn)染慢病毒組件質(zhì)粒。

•  轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞被返回Cellbags中。

•  在GMP合規(guī)的核心設(shè)施中進(jìn)行3次生產(chǎn)運(yùn)行,每次運(yùn)行均顯示出高滴度。


(3) 不同規(guī)模下的慢病毒生產(chǎn)一致性通過(guò)靜態(tài)電穿孔和流式電穿孔(使用MaxCyte)。

•  測(cè)量轉(zhuǎn)染后48小時(shí)的慢病毒滴度,結(jié)果顯示無(wú)論規(guī)模大小,生產(chǎn)力一致。


(4) 高效的高滴度AAV生產(chǎn):在貼壁HEK細(xì)胞中使用MaxCyte STX進(jìn)行三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染。

•  轉(zhuǎn)染后48小時(shí),幾乎100%的轉(zhuǎn)染細(xì)胞表現(xiàn)出強(qiáng)勁的轉(zhuǎn)基因表達(dá)。

•  通過(guò)qPCR分析測(cè)量細(xì)胞沉淀中的高滴度AAV。



04. 結(jié)果與分析

(1) 大規(guī)模慢病毒生產(chǎn):在貼壁HEK細(xì)胞中,使用MaxCyte STX進(jìn)行四質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染,每天收集培養(yǎng)基并測(cè)量轉(zhuǎn)導(dǎo)單位,結(jié)果顯示高效的生產(chǎn)能力。

(2) 懸浮細(xì)胞中的慢病毒生產(chǎn):在懸浮適應(yīng)的HEK 293FT細(xì)胞中,使用MaxCyte系統(tǒng)進(jìn)行生產(chǎn),3次生產(chǎn)運(yùn)行均顯示出高滴度,表明該技術(shù)在懸浮細(xì)胞中的可擴(kuò)展性和一致性。

(3) 不同規(guī)模下的慢病毒生產(chǎn)一致性:通過(guò)靜態(tài)和流式電穿孔在HEK細(xì)胞中生產(chǎn)慢病毒,結(jié)果顯示無(wú)論規(guī)模大小,生產(chǎn)力一致。

(4) 高效的高滴度AAV生產(chǎn):在貼壁HEK細(xì)胞中,使用MaxCyte STX進(jìn)行三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染,結(jié)果顯示幾乎100%的轉(zhuǎn)染細(xì)胞表現(xiàn)出強(qiáng)勁的轉(zhuǎn)基因表達(dá),并且通過(guò)qPCR分析測(cè)量到高滴度的AAV。




總體結(jié)論

MaxCyte的可擴(kuò)展電穿孔技術(shù)允許對(duì)貼壁和懸浮適應(yīng)細(xì)胞進(jìn)行高效轉(zhuǎn)染。該技術(shù)能夠共轉(zhuǎn)染多個(gè)質(zhì)粒和大質(zhì)粒,制造復(fù)雜的病毒載體。MaxCyte轉(zhuǎn)染過(guò)程的一致性使得無(wú)論培養(yǎng)規(guī)模如何,生產(chǎn)產(chǎn)量都具有一致性。高效的懸浮細(xì)胞轉(zhuǎn)染簡(jiǎn)化了使用MaxCyte過(guò)程進(jìn)行病毒載體制造的可擴(kuò)展性。通過(guò)MaxCyte電穿孔技術(shù)生成的高滴度AAV展示了該技術(shù)在制造應(yīng)用中的多樣性。



* 本文轉(zhuǎn)載自「拓普百奧」微信公眾號(hào),作者:宇文數(shù)學(xué)(已獲得作者授權(quán))




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